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Luminex公司每群圈出的微球區(qū)域熒光分布較窄,即使在兩個熒光通道的批間熒光CV高于5%都會出現(xiàn)較嚴重的偏離,在當前Luminex如此苛刻的設置下,其它廠家制備能在Luminex儀器上使用的磁性熒光編碼微球的難度甚至比Luminex公司自身生產(chǎn)微球還高。
基于我們在熒光編碼中積累的成熟技術,我們可以隨意調(diào)控微球在“Classification1"和“Classification2"熒光通道內(nèi)的熒光強度,因此具備了研發(fā)能在L家儀器上直接使用的微球的能力。如圖1所示,我們制備的24群微球能很好的落在L家的“圈圈"內(nèi)。到目前為止,我們已經(jīng)制備出40種能在Luminex200上使用的微球,后續(xù)我們將持續(xù)開發(fā)更多的能在L家儀器上使用的磁性熒光編碼微球。
圖1 可在Luminex200上的清晰區(qū)分的磁性熒光編碼微球
此外,我們也在分群差錯率方面,評估了這些微球是否能真正清晰區(qū)分,我們隨機選擇了12種微球,對應Luminex200的編碼為:12,18,25,26,35,51,54,61,66,67,72,78。并對單群微球逐一上機(Luminex200),統(tǒng)計各個編碼微球數(shù)量,得到如下報告:
圖2 12群微球上機得到的報告圖
從結果中可以看出,多個編碼的微球分群差錯率為0,整體微球分群差錯率不高于2%,這里面還包括了批量進樣時清洗不干凈導致的錯判,因此實際的分群差錯率更低。此外,由于報告熒光值一般采用中位數(shù)熒光值,這么低的錯判率不會影響最終結果的準確性。