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流式熒光技術(shù)又稱懸浮陣列或液相芯片,是近年來新興起的多指標(biāo)聯(lián)合檢測技術(shù),其不僅擁有化學(xué)發(fā)光高靈敏度、高精密度的優(yōu)勢,同時具備高通量、高速度、多重指標(biāo)聯(lián)檢等優(yōu)勢,克服了化學(xué)發(fā)光一次只能檢測一項(xiàng)指標(biāo)的不足,能夠滿足日益增長的臨床檢測需求,有望與化學(xué)發(fā)光形成互補(bǔ),甚至替代化學(xué)發(fā)光。流式熒光技術(shù)已被逐漸地應(yīng)用到臨床檢驗(yàn)、遺傳分析、藥物開發(fā)、生物醫(yī)學(xué)、藥物基因,以及生物戰(zhàn)的細(xì)菌檢測等。但是目前國內(nèi)的高通量流式熒光檢測微球以進(jìn)口為主,自主研發(fā)尚處于早期階段。
目前流式熒光術(shù)在國內(nèi)主要用于細(xì)胞因子的檢測。細(xì)胞因子檢測是判斷機(jī)體免疫功能的一個重要指標(biāo),因而具有重要的研究價值,同時在臨床上有諸多實(shí)用價值,對于許多疾病的診斷、病程觀察、療效判斷及細(xì)胞因子治療檢測都有重要的意義。在判斷機(jī)體免疫功能時,通常我們需要知道機(jī)體多個細(xì)胞因子的水平。而流式熒光技術(shù)的發(fā)明就像為檢測多個細(xì)胞因子指標(biāo)量身定做的一樣,完滿迎合了這種需要同時了解多個指標(biāo)的信息的需求。因此,目前國內(nèi)基于流式熒光術(shù)的細(xì)胞因子檢測迅速成為體外診斷的熱點(diǎn)之一,近兩年相關(guān)產(chǎn)品不斷涌現(xiàn)。然而,受制于熒光編碼微球的制備技術(shù),國內(nèi)市場上的細(xì)胞因子試劑產(chǎn)品絕大一部分都是國內(nèi)廠商通過進(jìn)口原料分裝進(jìn)行生產(chǎn)的。而國際上能夠提供細(xì)胞因子檢測試劑的主要生產(chǎn)商分別是美國的BD、Biolegend、AimPlex。這些廠家提供的試劑,微球不具有磁性,不利于發(fā)展相關(guān)的自動化儀器。此外,這些商家的微球采用單熒光標(biāo)記,同時檢測的指標(biāo)數(shù)量有限,即使采用兩種不同粒徑的微球搭配,也只能同時檢測10多種細(xì)胞因子。
此外,盡管流式熒光術(shù)能同時檢測多種細(xì)胞因子,但由于正常人的血清中細(xì)胞因子濃度較低,在實(shí)際檢測中,目前大部分試劑對正常人血清中各細(xì)胞因子的檢出率不高,一些血清樣本的熒光值甚至低于對照品濃度為0時的熒光值,結(jié)果的準(zhǔn)確性不高。究其原因,主要是熒光編碼微球?qū)晒鈾z測抗體的非特異吸附較強(qiáng),導(dǎo)致噪音較高(噪音為對照品為0時的檢測熒光值-微球本底檢測熒光值)。當(dāng)檢測低值血清樣本中,血清中存在復(fù)雜的蛋白質(zhì)體系,不可避免這些蛋白質(zhì)同樣會與微球產(chǎn)生非特異性吸附,從而與熒光檢測抗體競爭非特異性吸附位點(diǎn),使最終的熒光檢測值下降。因此減少熒光編碼微球?qū)晒鈾z測抗體的非特異性吸附可顯著提升低值血清樣本檢測的準(zhǔn)確性。
碧芯生物科技(海南?。┯邢薰就ㄟ^不斷摸索和優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,通過合成特殊的粒徑不同的微球,再用Avidin修飾微球表面,最終構(gòu)建了約60種低吸附的熒光編碼微球。與普通的熒光編碼微球相比,這些被特殊的微球具有對蛋白質(zhì)低非特異性吸附的特點(diǎn)。因此,用這種包裹好的熒光編碼微球構(gòu)建的抗原檢測試劑的噪音值明顯降低,可顯著提升靈敏度及低值血清樣本的檢出率
指標(biāo)名稱 | 碧芯生物Beadstar-mPlex 檢出率 | 某進(jìn)口品牌細(xì)胞因子檢出率 |
IL-2 | 20/20 (100%) | 15/20 (75%) |
IL-4 | 12/20 (60%) | 4/20 (20%) |
IL-6 | 18/20 (90%) | 10/20 (50%) |
IL-10 | 20/20 (100%) | 4/20 (20%) |
IL-17A | 11/20 (55%) | 9/20 (45%) |
TNF-α | 18/20 (90%) | 4/20 (20%) |
IFN-γ | 17/20 (85%) | 3/20 (15%) |
18189751352